今天讓我們一起來了解一下貝類毒素檢測的方法有哪些,話不多說下面讓我們一起了解一下吧。
1、小鼠生物檢測法
小鼠檢測法是應用多的貝類毒素檢測方法,可用于所有貝類毒素的檢測。該方法的優點是技術容易掌握,不需要使用專門儀器。小鼠生物檢驗法是將貝類毒素的提取物進行適當的稀釋后,對小白鼠進行腹腔注射,并計算平均致死時間。
小鼠生物測定法已被AOAC(美國公職分析家協會)作為海產品貿易中貝類麻痹性毒素的測定方法。但該方法的缺點是由于小鼠的大小以及小鼠個體情況的不同,因此造成靈敏度不高,偏差較大。
而且存在實驗小鼠用量大以及哺乳動物費用增加的缺陷。同時操作繁瑣,以及用該法測定高毒性貝類樣品時的變異性較高的缺陷。因此需要一種新的測定方法來彌補小鼠檢測法的不足。
2、高效液相色譜法
采用高效液相色譜(HPLC)等化學檢測法測定貝類毒素發展很快。HPLC法主要應用于PSP, DSP和ASP的檢驗上。與其它方法相比,HPLC法有著明顯的優越性:
(1)靈敏度高,專一性強,檢出限低;
(2)在酸性條件下不穩定的基團如氨甲?;鵑)磺基在分析的過程中不會解離;
(3)縮短了分析時間,通過自動注射技術,能處理更多的樣品,便于進行毒素監控;
(4)能提供關于毒素的更多信息,能測出每1個組分的具體含量及毒性的大小,從而有助于比較或了解毒素種類的差異。
3、免疫學測定方法
免疫學測定方法以抗原一抗體特異性反應為基礎,其中包括凝集反應、沉淀反應、補體反應等??捎糜赑SP,DSP和NSP的檢測,其原理是將兔子等實驗動物暴露在毒素中,以功能性抗原刺激兔子產生抗體,然后從兔子的血清中提取抗體??贵w可用放射性或熒光物質標記。
提取的貝類毒素或勻漿后的貝類組織(如貽貝)暴露于標記物中,然后檢測抗血清一抗原混合物中放射性或熒光強度以測定樣品中的毒素的含量。
4、細胞檢驗法
細胞檢測法是建立在貝類毒素對生物細胞影響的基礎上。許多實驗已證明麻痹性貝類毒素的致病機理是通過對細胞鈉通道的阻斷,造成神經系統傳輸障礙而產生麻痹作用。
其實驗原理如下:當加入烏本苷這種物質時,可增加鈉的流入,此時小鼠的成神經細胞瘤擴張并后溶解暴露在藜蘆丁中。
但在麻痹性貝類毒素存在時,這兩種物質的作用可得到抑制,麻痹性貝類毒素通過對細胞鈉通道的阻斷,可使細胞形態保持完整。與麻痹性類毒素不同,腹瀉性貝類毒素的細胞檢驗法是建立在肝細胞形態的變化基礎上的。
5、其它檢測方法
其它檢測方法包括分光光度法,電泳法(常用的是毛細管電泳,主要用于分離測定PSP毒素中的非衍生毒素),薄層色譜法和氣相色譜法(用來檢驗軟海綿酸)等化學檢驗法,此外,還包括家蠅生物檢驗法,蝗蟲生物檢驗法,神經細胞生物檢驗法(又稱組織培養分析法,可用于PSP,ASP和DSP的分析的新方法)等生物檢驗法。